El Intercambio de Cassette Recombinasa Mediada (ICRM, inglés: Recombinase-mediated cassette exchange) es un procedimiento genético para modificar organismos superiores genéticamente.
Principios Generales
La mayoría de las células de levadura contienen circulares de ADN, plásmidos como llamados "círculos de dos micras". En este plásmido hay secuencias cortas de ADN específicas llamada sitios de FRT (objetivos flip-recombinasa) y una enzima llamada flippase (Flp). Estas secuencias y la enzima son absolutamente necesarias para la replicación del plásmido "círculos de dos micras".
Principios de Aplicaciones Biotecnológicas
La enzima (Flp) y los sitios de FRT de tipo silvestre (F) y mutantes (Fn) pueden ser utilizada para modificar organismos genéticamente.[1][2] Existen las siguientes posibilidades:
Integración
Integración de un pedazo de ADN que lleva dos diferentes sitios de FRT.
Inversión
La inversión de una secuencia que está flanqueada por dos sitios de FRT idénticos, pero inversamente orientado.
Eliminación
La eliminación de una secuencia que está flanqueado por dos sitios de FRT idénticos igualmente orientadas.
Ejemplos de Aplicaciones
Generación de animales transgénicos
Generación de ratones transgénicos (knock-out/-in) y su modificación genética vía RMCE.[1] [2]
Tagging e intercambio de cassette genético en DG44 células en cultivo suspensión
Inserción de un casete de destino en una línea de células de mamífero (CHO) y se intercambiará con un reportero gen de estrés de ER vía RMCE.[3]
Véase también
Referencias
- ↑ a b Cesari F, Rennekampff V, Vintersten K, Vuong LG, Seibler J, Bode J, Wiebel FF, Nordheim A (Feb de 2004). «Elk-1 knock-out mice engineered by Flp recombinase-mediated cassette exchange». Genesis 38 (2): 87-92. PMID 14994271. doi:10.1002/gene.20003.
- ↑ a b Roebroek AJ, Reekmans S, Lauwers A, Feyaerts N, Smeijers L, Hartmann D (Jan de 2006). «Mutant Lrp1 knock-in mice generated by recombinase-mediated cassette exchange reveal differential importance of the NPXY motifs in the intracellular domain of LRP1 for normal fetal development». Mol Cell Biol 26 (2): 605-16. PMC 1346909. PMID 16382151. doi:10.1128/MCB.26.2.605-616.2006.
- ↑ Kober L, Zehe C, Bode J (octubre de 2012). «Development of a novel ER stress based selection system for the isolation of highly productive clones». Biotechnol. Bioeng. 109 (10): 2599-611. PMID 22510960. doi:10.1002/bit.24527.
- J. Bode, S. Götze, M. Klar, K. Maaß, K. Nehlsen, A. Oumard & S. Winkelmann (2004) BIOForum 34-36 Den Viren nachempfunden: Effiziente Modifikation von Säugerzellen.
- Cesari, F., Rennekampff, V., Vintersten, K., Vuong, L. G., Seibler, J., Bode, J., Wiebel, F. F., Nordheim, A. (2004). «Elk-1 knock-out mice engineered by Flp recombinase-mediated cassette exchange». Genesis 38 (2): 87-92. PMID 14994271. doi:10.1002/gene.20003.
- Roebroek, A. J. M.; Reekmans, S.; Lauwers, A.; Feyaerts, N.; Smeijers, L.; Hartmann, D. (2006). «Mutant Lrp1 knock-in mice generated by RMCE reveal differential importance of the NPXY motifs in the intracellular domain of LRP1 for normal fetal development». Mol. Cell. Biol. 26 (2): 605-616. PMC 1346909. PMID 16382151. doi:10.1128/MCB.26.2.605-616.2006.
- Branda, C.S.; Dymecki, S.M. (2004). «Talking about a revolution: the impact of site-specific recombinases on genetic analyses in mice. Develop». Cell 6 (1): 7-28. PMID 14723844. doi:10.1016/S1534-5807(03)00399-X.
- Oumard, A.; Qiao, J.; Jostock, T.; Li, J.; Bode, J. (2006). «Recommended Method for Chromosome Exploitation: RMCE-based Cassette-Exchange Systems in Animal Cell Biotechnology». Cytotechnology 50 (1–3): 93-108. PMID 19003073. doi:10.1007/s10616-006-6550-0.
- Qiao, J.; Oumard, A.; Wegloehner, W.; Bode, J. (2009). «Novel Tag-and-Exchange (RMCE) Strategies Generate Master Cell Clones with Predictable and Stable Transgene Expression Properties». J. Mol. Biol. 390 (4): 579-594. PMID 19447116. doi:10.1016/j.jmb.2009.05.012.
- Turan, Soeren; Galla, Melanie; Ernst, Ellen; Qiao, Junhua; Voelkel, Christine; Schiedlmeier, Bernhard; Zehe, Christoph; Bode, Juergen (2011). «Recombinase-Mediated Cassette Exchange (RMCE): Traditional Concepts and Current Challenges». Journal of Molecular Biology 407 (2): 193-221. PMID 21241707. doi:10.1016/j.jmb.2011.01.004.
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